1、如何增加外泌体试剂盒的提取效率？答：首先，样品准备阶段确保样品的质量和数量充足；在提取阶段，加入ECS试剂后可以通过增加静置时间来提高提取效率，但同时也可能影响到纯度，因此静置时间也需要适当控制，初次实验可以考虑静置过夜。2、离心后无法看到沉淀如何处理？答：样品中的外泌体是微量的存在，离心后无法看到沉淀属于正常现象。建议离心后用PBS重悬沉淀时不仅洗脱肉眼可见的沉淀部位，还要吹洗离心管外侧靠近底部的狭长区域，具体位置根据离心机倾斜角度决定。建议在下次样品准备阶段确保样品的质量和数量充足，干细胞/原代细胞上清可在提取前采用超滤管（100KD）浓缩3~5倍后再提取。3、使用EPF柱时堵塞如何处理？答：过滤柱的孔径在220nm左右。如果出现堵塞情况，可以将柱子旋转180度再次离心。若上室还有残留液体，需要使用新的EPF柱，该柱子可以单独购买（货号UR90102）。4、沉淀法的具体原理是什么？答：将高亲水性聚合物（聚乙二醇等）添加到含外泌体的溶液中后，外泌体周围的水分子被聚合物束缚，降低了外泌体的溶解度并诱导其随后的沉淀，使外泌体在低速离心下可以很容易沉淀。5、开封后的ECS试剂有沉淀出现

近年来，外泌体在生物医学领域引起了广泛的关注。外泌体主要是指由哺乳动物细胞主动向胞外和体液中释放的纳米级双层囊泡小体，携带多种遗传物质，可通过自分泌或旁分泌途径被细胞吸收，也可经循环系统被远距离靶组织或器官所吸收，参与机体多种生理和病理过程。由于外泌体携带着丰富的生物信息分子（例如蛋白质、核酸等），因此也能够在细胞间通讯、免疫调节、疾病发生发展等多个生物学过程中发挥着关键性作用。此外，也正是由于外泌体所蕴含的巨大潜力，科学家们对其寄予厚望，并期望它们能成为未来疾病诊断和治疗的新星。为了帮助广大医学科研工作者快速掌握和了解外泌体研究领域的最新动态，今天就给大家盘点一下外泌体研究领域近期发表的 10 篇高分文章，供大家阅读和学习，希望可以给相关研究领域学者带来新的研究思路（。1. 细胞外囊泡（EV）蛋白冠可影响其在肝细胞中的摄取以及体内分布情况2024 年 2 月 16 日，英国伦敦伦敦国王学院生命科学与医学学院药物科学研究所研究团队在Nature Nanotechnology（影响因子：39.9）期刊发表了题为：Cellular uptake and in vivo distributi

全球范围内，心血管疾病与癌症死亡率分别占居民疾病死亡总数的 32% 和 26%。许多心衰患者死于非心血管疾病，包括癌症。多项临床流行病学和前瞻性队列研究发现，与未患心血管疾病的人群相比，心血管疾病患者罹患癌症的风险更高；携带较多心血管疾病风险因素的人群患癌风险也更高。已有研究表明，心衰加速肿瘤生长，心衰促进肿瘤生长可能与心脏分泌相关因子SerpinA3有关。2023 年 3 月 27 日，哈尔滨医科大学药学院的杨宝峰院士/杜伟杰教授团队在 Signal Transduction and Targeted Therapy 发表了题为「Exosomes secreted from cardiomyocytes suppress the sensitivity of tumor ferroptosis in ischemic heart failure」的研究论文，该研究发现心肌梗死引起的心衰降低了肿瘤对铁死亡诱导剂的敏感性。首先，作者构建了心衰小鼠模型，并给 Sham 小鼠和MI小鼠接种肿瘤，结果心衰加速了肿瘤的生长，这与研究报道相符。此外，作者对 Sham 和MI小鼠接种肿瘤后用 Era

南京大学医学院附属鼓楼医院内分泌科毕艳教授团队和南京大学生命科学学院张辰宇、李靓教授团队合作，首次发现外泌体可介导脂肪-大脑间通讯并促进糖尿病认知功能障碍的发生。研究成果发表在国际著名期刊《Cell Metabolism》上。研究背景：糖尿病显著增加认知障碍的发生风险，严重影响老年人健康生存状态。临床研究表明控制血糖不能保护认知功能，因此需要进一步揭示糖尿病认知功能障碍的机制，寻找治疗糖尿病认知障碍的新策略。脂肪组织外泌体作为新型脂肪因子，可参与脂肪组织与其他外周组织器官间的生物信号传递以及代谢调控，但能否介导脂肪组织与大脑信息交流的发生尚不明确。研究结果：作者利用脂肪移植和多种外泌体示踪技术，发现肝脏来源的细胞外囊泡（EVs）不能介导外周组织和大脑间通讯，而脂肪组织来源的 EVs 是形成二者通讯的重要生物学介质；在胰岛素抵抗及糖尿病状态下，脂肪组织 EVs 携带的内容物 miRNAs 促进海马突触丢失和认知功能损伤。研究团队进一步利用小 RNA 测序和转录组测序技术，识别了脂肪组织来源的EVs中造成糖尿病认知功能损伤的系列关键分子，发现人和小鼠共有的致病分子 miR-9-3p 通过靶

外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡（30～150 nm），它可将源自亲代细胞的特定物质递送至疾病发展相关的受体细胞，因此一直被认为可作为疾病进展的潜在生物标志物用于诊断，但具体机制仍不清楚。外泌体 RNA 作为癌症诊断标志物是否可行？CircLPAR1 是外泌体中的环状 RNA 分子，在结直肠癌（CRC）患者血浆外泌体中会发生显著变化。南京医科大学团队在Molecular cancer发文[1]，通过对 CRC 特异性的外泌体 circRNA 进行鉴定和富集，最后使用 qPCR 检测后进行功能评估。本研究对血浆外泌体 circLPAR1 可作为 CRC 高灵敏早期诊断标志物提供了新的证据。qPCR 检测外泌体是强强联手还是无稽之谈？我们也许会有疑问：外泌体本来就少，提取的 RNA 就更少，后续做 qPCR 检测岂不是难上加难？想知道 qPCR 检测外泌体是否具有合理性，我们需要先了解如何进行这项实验。实验过程：1）外泌体提取包括 Umibio 在内的很多公司都有针对各种不同样本的外泌体提取试剂盒。样本预处理阶段很重要，甚至决定了后续提取外泌体的纯度和量。2）RNA 提取

TEM 透射电镜是外泌体鉴定的金标准，对于所有做外泌体的朋友们来说，是必经之路，基于很多老师们的呼声，我们的研究人员，经过细致化整理，把所有的操作过程都整理出来，供各位参考，经验有限，有不当之处，还请多多沟通。一、首先，我们看看电镜的原理是啥？然后，电镜的结构也是比较复杂的！二、那么，我们看看样品有哪些要求？样品要求：1、能被电子束穿透（薄）2、耐电子束轰击3、有磁性的样品不可以放置4、长纤维样品若需上样需加盖铜网三、接下来，我们看看规范化拍摄 Umibio 是怎么操作的？声明：本次操作基于我司最近正在使用的 HT7700；1、送样要求：样品尽可能浓，颗粒浓度 1.0E+10；2、拍摄规范：样品以茶托状（有明显凹陷的）球形，椭球形或扁圆形，尺寸在 30-150nm，有双层膜结构的颗粒为目标进行拍摄；照片以轮廓清晰，分辨率高，焦距合适（既没有过焦的虚影，也没有欠焦的黑边），背景杂质少，明暗适宜，颗粒居中，整体美观为佳；默认拍摄 100nm 一张，200nm 三张，500nm 一张；注：铜网中样品焦距无法调清时以调试后的最佳结果拍摄，样品中无特征明显的颗粒或无颗粒时，拍摄 500nm 的样

首先，我们先看原理：纳米颗粒示踪分析仪(NTA)利用光散射和布朗运动的属性，以获得液体悬浮液中样品的粒径分布。颗粒的运动速度和其粒径有着直接的关联；此技术观测的是颗粒的散射光斑，而不是颗粒本身； 「眼见为实」,确保分析的是目标颗粒而不是背景颗粒或噪音。然后，我们看下设备介绍：（声明：本次操作基于最近正在使用的 NS300。）然后，我们看下具体是如何操作的：开机→清洗→上样→设置参数→调整视野→设置保存路径→检测 →仪器自动分析结果→出报告→保存后下样关机说明：散射光模式与荧光检测模式的步骤差别只有设置的参数不同，其余步骤一致，输出的报告格式也一致；1、 开机；2、打开电脑显示屏上的软件系统；3、注射器吸稀释液打入管路，清洗残留，再打入空气去除稀释液。用稀释液清洗盖板与激光器接触面，用无尘纸擦干；4、安装盖板，螺丝固定（对角线）；5、用注射器（查看是否有气泡）将试剂样注入样品池，椭圆形镜片观察到液面全覆盖即可；6、激光器推入仪器，滑轨到底，绿灯亮时转上红色开关（位置正确时，开关转的很轻松）；7、设置参数，Screen Gain（屏幕增益）和 Camera level（相机级别），一般 4

实验目的：通过 DIR 染料标记外泌体，通过尾静脉注射 DIR-labeled Exosome，24 小时内观察外泌体在体内的代谢情况。实验材料：DIR- Exosome，裸鼠；DIR-Exosome：染料终浓度 1uM，外泌体 200ug，体积 200ul；Exosome 来自 HEK293 无血清培养基（Umibio，UR51102）条件下获得，通过外泌体提取试剂盒提取（Umibio，UR52121）。实验内容：1、通过尾静脉注射 200 ug/支的 DIR- Exosome 到裸鼠体内；Day 1， AM：8：00 注射；2、 小动物活体成像观察：Day 1， PM：16: 00 小动物活体成像观察，全身和颅内（重点）。Day 2， AM：8：00 小动物活体成像观察，全身和颅内（重点）。Day 3， AM：8：00 小动物活体成像观察，全身和颅内（重点）。48 小时成像结束后，实验结束。实验结果：1、尾静脉注射 DIR-Exosome 8 小时后，小动物活体成像检测：2、尾静脉注射 DIR-Exosome 24 小时后，小动物活体成像检测：3、尾静脉注射 DIR-Exosome

摘要：外泌体是一种由细胞主动分泌的纳米级脂质双层囊泡，其腔内或脂质双分子层中包裹着蛋白质、脂质和核酸等多种生物成分。外泌体具有低免疫原性、高物理化学稳定性、高组织穿透能力，以及先天的运输能力，因此有望成为一类新型的药物递送载体。目前，外泌体作为药物递送载体的研究已取得了可喜的进展，有关外泌体分离以及提高其药物负载和递送效率的新方法不断涌现。然而，仍有许多困难制约了外泌体的临床应用。综述了外泌体作为药物递送载体的研究进展，对外泌体大规模生产和纯化中的技术难点进行了分析，并总结了外泌体用于药物递送的法规问题。1 外泌体简介细胞外囊泡（extracellular vesicle，EV），根据大小、功能、来源的不同，可分为 3 种类型：外泌体、微囊泡和凋亡小体。外泌体是多囊泡体与细胞膜融合后分泌的直径为 30 ~ 150 nm 的 EV，微囊泡是细胞膜通过出芽直接脱落的直径为 100 ~ 1 000 nm 的 EV，凋亡小体是细胞在凋亡过程中释放的直径为 50 ~ 5 000 nm 的 EV。EV 是由大多数细胞通过多种机制形成的异质性细胞衍生囊泡。EV 通过多种体液（如血液、淋巴液、唾液、脑

外泌体研究之超滤浓缩操作详解

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为了聚焦业务需求、提供更好的外泌体科研服务质量，恩泽康泰一向不贪婪，一心搞“人/小鼠/大鼠”临床科研外泌体服务产品，所谓干一行爱一行干好一行，直到今天我们在外泌体组学领域已经与临床客户深度合作发表了150+ SCI文章（其中部分高水平SCI文献已解读，请查阅《合作成果》合辑）。从2017年6月1号成立到2024年3月底近7年耕耘，从最初开发的专利Exosupur®外泌体纯化试剂盒到集细胞上清/血浆/二次纯化袖珍柱Exos ...

深入细胞生物学的世界，探索超分辨显微镜的全新进展

Evident 产品专家经验分享

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研究背景「应激」是抑郁症发病的主要原因，然而，当面对应激和创伤时，并不是所有人都将发展为抑郁症，甚至有些抑郁症患者能够「自复原」，提示机体存在对抗负性应激的能力，称为「心理韧性」。「心理韧性」是指机体以健康的方式从应激、创伤或长期逆境中恢复的能力。阐释「心理韧性」的生物学机制可能为精神疾病防治开辟新途径。研究内容与结果2023 年 3 月 30 日，琶洲实验室朱心红教授研究团队在 Cell 在线发表题为 A thalamic-primary auditory cortex circuit mediates resilience to stress 的研究成果[1]。该工作发现了面对应激时，抑郁非易感小鼠内侧膝状体谷氨酸能神经元形成超极化，引起初级听皮层的 PV（parvalbumin）神经元一方面启动内源性稳态机制维持其兴奋性，另一方面，促进相邻的兴奋性神经元释放脑源性营养因子，作用于内侧膝状体投射神经元的末梢，从而增强丘脑—皮层环路功能对抗应激；抑郁易感小鼠缺乏类似的「韧性」机制。该研究为阐释内源性「心理韧性」机理提供了新思路。研究人员首先基于经典的抑郁模型---社会失败模型（Chr

本文作者：陈小青 博士华东师范大学化学与分子工程学院研究背景异质性是细胞膜生物物理化学最重要的特性之一。细胞膜上富含胆固醇/鞘脂的高度动态的结构域，被称为脂筏。脂筏充当信号分子组装平台，参与多种信号转导过程。然而，由于脂筏高度动态特性，成像技术难以对活细胞上脂筏实时成像，因而脂筏动态组装过程与下游信号通路间的难以建立定量关联。近期，华东师范大学李迪教授团队与中国科学院上海有机化学研究所生物与化学交叉研究中心葛一凡副研究员合作，提出利用局域温度变化扰动细胞膜功能域分布的策略[1]。作者利用 DNA 折纸技术制备了兼具高空间分辨和化学分辨的光热响应分子工具，通过近红外激光操纵局部脂质环境温度来扰动脂筏的相分离程度（图 1）。相关研究工作以「高空间分辨热操纵细胞膜异质性改变细胞迁移及信号通路（High Spatial-resolved Heat Manipulating Membrane Heterogeneity Alters Cellular Migration and Signaling）」为题，发表在Proceedings of the National Academy of Sci